MTT实验是一种常用的细胞活性检测方法，广泛应用于生物学研究中。通过测量细胞对特定试剂（MTT）的代谢能力，可以评估细胞的存活率和增殖情况。以下是进行MTT实验的基本操作步骤：

1. 实验准备

在开始实验前，确保所有实验材料和试剂已经准备好。这包括细胞培养基、MTT溶液、PBS缓冲液、96孔板以及移液器等工具。

2. 细胞接种

将适量的细胞悬液加入到96孔板中，每孔接种一定数量的细胞。通常情况下，每个孔中的细胞数应保持一致，以保证实验结果的准确性。

3. 培养细胞

将接种好的96孔板放入恒温培养箱中进行培养。根据实验需求设置适当的温度和二氧化碳浓度，一般为37℃和5% CO₂。

4. 添加MTT溶液

在培养结束后，向每个孔中加入适量的MTT溶液。MTT是一种黄色的水溶性四氮唑盐，在活细胞线粒体脱氢酶的作用下被还原成不溶性的蓝紫色甲臜结晶。

5. 停止反应

让细胞与MTT溶液反应一段时间后，加入终止液停止反应。终止液通常是酸化的异丙醇或SDS溶液，用于溶解形成的甲臜结晶。

6. 测量吸光度

使用酶标仪测定各孔的吸光度值。通常选择490nm波长作为检测波长，记录每个孔的OD值。OD值越高，表明细胞活性越强。

7. 数据分析

通过计算不同处理组之间的OD值差异，可以得出细胞存活率或增殖指数。常用公式为：

\[ \text{细胞存活率} (\%) = \frac{\text{实验组OD值}}{\text{对照组OD值}} \times 100\% \]

以上就是MTT实验的操作步骤。在实际操作过程中，需要注意控制变量，确保实验条件的一致性，从而获得可靠的数据结果。